帶你走近細胞生物學世界的第一步——細胞培養

發布時間： 2021-10-21　　點擊次數： 1178次

細胞培養的概念：

細胞培養（cell culture）是指在體外模擬體內環境（無菌、適宜溫度、酸堿度和一定營養條件等），使之生存、生長、繁殖并維持主要結構和功能的一種方法。細胞培養也叫細胞克隆技術，在生物學中的正規名詞為細胞培養技術。細胞培養技術可以由一個細胞經過大量培養成為簡單的單細胞或極少分化的多細胞，通過細胞培養既可以獲得大量細胞，又可以借此研究細胞的信號轉導、細胞的合成代謝、細胞的生長增殖等。

細胞培養所需的儀器設備：

倒置顯微鏡		便于掌握細胞的生長情況（細胞形態、大小、密度、結構）并觀察有無污染等
細胞培養箱		可以精確地提供細胞培養需要的溫度、濕度、氣體環境，有效防止細胞污染
超凈工作臺		用于細胞培養實驗的無菌操作
低速離心機		制備細胞懸液、調整細胞密度、洗滌、收集細胞（800rpm-1000rpm，5min）
水浴鍋		用于細胞復蘇、預熱培養基等
移液槍		用于吸取、移動液體或滴加樣本
細胞培養瓶、培養皿		用于培養、繁殖細胞
細胞培養相關耗材		用于細胞培養實驗中收集細胞，保存細胞等

細胞培養所需的試劑：

培養基	為細胞提供營養，促進細胞增殖的基礎物質
緩沖溶液	用于清洗細胞，去除沒有營養的舊培養基及細胞碎片等雜質，為細胞提供適宜的pH作用及鹽平衡作用
血清	提供細胞生長和繁殖所需的生長因子、激素、各種蛋白、促進貼壁和伸展的因子及細胞傳代時所需的蛋白酶抑制劑和其他多種不明營養物質
胰蛋白酶	使細胞之間的蛋白質水解，從而使細胞分離，常用于細胞傳代
抗生素	防止細胞污染，使細胞在體外的無菌環境中更好的生長
凍存液	提高細胞膜對水的通透性，并且緩慢冷凍可使細胞內的水分滲出細胞外，減少細胞內冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷，最大限度的保持細胞活力
其他添加成分	為不同的細胞培養條件提供特定的營養物質

細胞培養的類別：

原代細胞(primary cell)是指從機體的組織中經蛋白酶或其它的方法獲得、并在體外進行培養的細胞，稱為原代細胞。一般認為，培養的原代的第1代細胞和傳代到第10代以內的細胞統稱為原代細胞培養。

細胞系(cell strain)：原代培養物經胰酶等物質第一次消化傳代后即為細胞系，由原先存在于原代培養物中的細胞系所組成。如果不能繼續傳代，或傳代次數有限，可稱為有限細胞系，如可以連續培養，則稱為連續細胞系，培養50代以上并無限培養下去。

細胞株(cell line)：從細胞系中用單細胞分離培養或篩選的方法，由單細胞增殖形成的細胞群，稱細胞株。細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養期間始終存在。如果不能繼續傳代或傳代有限，稱為有限細胞株；如果可以連續傳代，稱為連續細胞株。

細胞培養的過程：

細胞復蘇：

將凍存的細胞從液氮中取出后，在37℃水浴鍋內不斷搖動直到*融化后放入離心機中，800rpm-1000rpm，5min，然后在超凈臺中將上清液棄掉，加入1ml預熱的培養基，輕輕吹勻后轉移到培養瓶中，補足細胞生長所需的培養基，呈“十"混勻后放入含5%CO₂的細胞培養箱中培養。

細胞傳代：

待細胞密度達到80%~90%時，棄去原培養基，用5ml PBS清洗3次。加入一定量含0.25% EDTA的胰蛋白酶，放入細胞培養箱中（不同的細胞消化時間不同）。待細胞消化*后加入胰蛋白酶的3倍體積的含血清培養基進行中和，輕輕吹吸混勻，根據細胞生長特性進行1：2或1：3傳代培養。

細胞凍存：

待細胞密度達到80%~90%時，棄去原培養基，用5ml PBS清洗3次。加入一定量含0.25% EDTA的胰蛋白酶，放入細胞培養箱中（不同的細胞消化時間不同）。待細胞消化*后加入胰蛋白酶的3倍體積的含血清培養基進行中和，輕輕吹吸混勻，轉移到離心管中800rpm-1000rpm，5min進行離心，然后在超凈臺中將上清液棄掉，加入1ml凍存液，放入凍存盒內（盒內有異丙醇，以保證梯度降溫），立即放入一80℃冰箱內，第二天轉入液氮中，可以保存至少兩年。